Question
Download Solution PDFमानव रोगी के नमूनें में IL-17 के सीरम में मात्रा को परिमाणित करने के लिए विभिन्न प्रयोगिक विधियों का उपयोग किया गया। एक मानक नैदानिक परिस्थिति में निम्नांकित कौन सी एक विधि सर्वाधिक सटीक प्रमात्रीकरण प्रदान करेगा?
Answer (Detailed Solution Below)
Detailed Solution
Download Solution PDFसही उत्तर विकल्प 4 है अर्थात मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोपो के विरूद्ध एकक्लोनी प्रग्रहण तथा संसूचन प्रतिरक्षीयों के साथ सैंडविच ELISA।
Key Points
सैंडविच ELISA
- इस दृष्टिकोण में सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट एसे (ELISA) सेटअप का उपयोग किया जाता है, जहां दो अलग-अलग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है: एक IL-17a को पकड़ने के लिए और दूसरा इसका पता लगाने के लिए।
- ये एंटीबॉडी IL-17a प्रोटीन अणु पर विभिन्न एपिटोप्स (विशिष्ट बंधन स्थलों) से बंधने के लिए निर्मित किए गए हैं।
- यह दृष्टिकोण सटीक क्यों है, आइए जानें:
- उन्नत विशिष्टता:
- IL-17a के विभिन्न एपिटोप्स को पहचानने वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से परख की विशिष्टता बढ़ जाती है।
- यह दोहरी एंटीबॉडी बंधन यह सुनिश्चित करता है कि पता लगाया गया संकेत वास्तव में लक्ष्य प्रोटीन से है और अन्य अणुओं से हस्तक्षेप को न्यूनतम करता है।
- पृष्ठभूमि शोर कम:
- IL-7A अणु के विभिन्न क्षेत्रों को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी का उपयोग करके, गैर-विशिष्ट बंधन के कारण होने वाले पृष्ठभूमि शोर को कम किया जाता है, जिससे माप की सटीकता बढ़ जाती है।
- परिमाणीकरण:
- IL-7A की ज्ञात सांद्रता वाले मानक वक्रों के उपयोग से रोगी के नमूनों में लक्ष्य प्रोटीन की सटीक मात्रा का पता लगाना संभव हो जाता है।
- उत्पन्न संकेत उपस्थित IL-17a की सांद्रता के सीधे आनुपातिक होते हैं।
- पुनरुत्पाद्यता:
- सैंडविच ELISA एक अच्छी तरह से स्थापित तकनीक है जिसमें उच्च पुनरुत्पादकता है, जो इसे नैदानिक सेटिंग्स के लिए उपयुक्त बनाती है जहां सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम आवश्यक हैं।
- संवेदनशीलता:
- दो मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के संयोजन से परख की संवेदनशीलता बढ़ जाती है, जिससे IL-17a की कम सांद्रता का पता लगाना संभव हो जाता है।
- सत्यापन:
- विभिन्न एपिटोप्स के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का प्रयोग करने से परिणामों में विश्वास बढ़ता है, क्योंकि लक्ष्य प्रोटीन को स्वतंत्र बंधन स्थलों का उपयोग करके पकड़ा और पता लगाया जाता है।
इसके विपरीत, अन्य विकल्पों की कुछ सीमाएँ हैं:
विकल्प 1: समान एपिटोप के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से हस्तक्षेप और अवास्तविक सकारात्मकता की संभावना बढ़ सकती है।
विकल्प 2: SDS-PAGE और वेस्टर्न ब्लॉटिंग गुणात्मक हो सकते हैं और उचित नियंत्रण और मानकों के बिना सटीक मात्रात्मक डेटा प्रदान नहीं कर सकते हैं।
विकल्प 3: पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के साथ प्रत्यक्ष ELISA में सैंडविच ELISA की विशिष्टता का अभाव होता है और गैर-विशिष्ट बंधन के कारण गलत परिणाम हो सकते हैं।
सैंडविच ELISA तकनीक का इस्तेमाल आमतौर पर जैविक नमूनों में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इसमें लक्ष्य प्रोटीन को पकड़ने और उसका पता लगाने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया जाता है। IL-17 मात्रा निर्धारण के मामले में, सैंडविच ELISA में मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोप्स के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग अन्य तरीकों की तुलना में अधिक विशिष्टता और संवेदनशीलता प्रदान करता है।
Last updated on Jul 8, 2025
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